Optimización de un protocolo de transformación genética mediada por agrobacterium tumefaciens para el mejoramiento de café (coffea arabica l. Var. Catuaí)

Abstract

Coffea arabica L. es un cultivo de gran importancia económica y social. Sin embargo, debido a la homogeneidad genética entre sus variedades, se presenta una susceptibilidad general a plagas y enfermedades. Las técnicas convencionales para el mejoramiento del café requieren un mínimo de treinta años para el desarrollo de un nuevo cultivar, por lo que se propone la ingeniería genética como un método de mejoramiento del cultivo basándose en técnicas como la transformación mediada por Agrobacterium tumefaciens. El objetivo principal de este trabajo es establecer un protocolo de transformación genética mediada por A. tumefaciens en café (Coffea arabica L. var. Catuaí). Para ello, segmentos de hoja y embriones cigóticos se cultivaron con las cepas de A. tumefaciens ATHV y GV3101 transformadas con el plásmido pCAMBIA 1303. Con los explantes transformados se realizó una prueba GUS y se determinó que la mejor transformación genética se obtuvo al utilizar embriones cigóticos y la cepa ATHV::1303. Se realizó una extracción de ADN con los supuestos embriones transformados y se amplificó por PCR un fragmento del gen gfp con el fin de comprobar la transformación eficiente de los mismos. Asimismo, se realizó una PCR para un fragmento del gen virG con los explantes positivos a la amplificación del gen anterior para comprobar que su amplificación no fue debida a contaminación bacteriana. Finalmente se realizó una PCR utilizando cebadores universales para la región 18S en las muestras extraídas para verificar que la calidad del ADN no hubiera interferido en la amplificación del fragmento del gen gfp. En este caso, de las 11 muestras extraídas, 5 amplificaron positivamente para el gen gfp y de éstas, todas resultaron negativas para el gen virG. Todas las muestras amplificaron el fragmento de la región 18S. Se estableció un protocolo de transformación mediada por A. tumefaciens en Coffea arabica L. var. Catuaí, el cual se podrá utilizar posteriormente para conferir resistencia a enfermedades y plagas