Diseño e implementación de un método para la detección de Ralstonia solanacearum raza 3 biovar 2 en plantas usando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Abstract

Ralstonia solanacearum es una bacteria fitopatógena que causa incalculables pérdidas alrededor del mundo. En tiempos recientes R. solanacearum raza 3 biovar 2 ha tomado gran importancia debido a que no se encuentra diseminada por los Estados Unidos. Costa Rica como exportador de geranio, una de las especies afectadas, debe contar con un método para detectarla en muestras vegetales de exportación. Como los métodos tradicionales no llegan a identificar a nivel de biovar, las técnicas moleculares se convierten en una importante herramienta. Se planteó un método para la detección de esta bacteria por medio de PCR usando en primer lugar imprimadores específicos para la especie y en segundo lugar imprimadores específicos para el biovar 2. Las pruebas moleculares se apoyaron con una serie de pruebas preliminares que incluyeron desde el diagnóstico a nivel de síntomas hasta montajes al microscopio. Se determinó que los imprimadores escogidos cumplen con la función requerida y además que las pruebas preliminares de exudación del tallo y del kit ACL Immunostrips de Agdia® concuerdan y por lo tanto apoyan las pruebas moleculares

Ralstonia solanacearum is a phytopathogenic bacteria that cause incalculable losses around the world. In recent times R. solanacearum race 3 biovar 2 have taken great importance because it is not disseminated in the United States. Costa Rica like geranium exporter, one of the affected species, should have a method to detect it in export vegetables samples. As the traditional methods don`t end up identifying at biovar level, the molecular techniques become an important tool. Here thought about a method for the detection of this bacteria by PCR using specific primers for the specie first and specific primers for the biovar 2 in second place. The molecular test leaned on a preliminary test that included from the diagnosis at symptoms level until microscopic observation. The chosen primers fulfills the required function and also it determined that the preliminary test like exudation test and kit ACL Immunostrips test agrees and therefore they support the molecular tests.