Comparación de tres métodos de extracción y purificación de ADN a partir de restos óseos para análisis forense.

Abstract

La extracción de ADN a partir de hueso implica la utilización de metodologías complejas debido a problemas como la degradación, las cantidades limitantes de ADN y la presencia de sustancias inhibidoras que pueden ser co-extraídas con el ADN. En el Laboratorio de Genética Forense del OIJ se ha dificultado la estandarización de un protocolo útil para extracción y análisis de ADN de alta calidad y cantidad. Con el fin de encontrar un método que proporcione las mejores condiciones de extracción, purificación y amplificación de ADN, se realizó la comparación de tres metodologías de extracción de ADN a partir de restos óseos, entre ellas el método de desmineralización, el método orgánico utilizado actualmente en el laboratorio, procedente del FBI y el Kit comercial Qiagen Blood Maxi Kit. También se efectuó la comparación de técnicas de purificación adicionales en los protocolos de desmineralización y FBI. La desmineralización mostró ser un método prometedor para la extracción y amplificación de ADN de restos óseos presentado los mejores resultados de cuantificación; mientras que las columnas Centricon® YM-50 mostraron las mejores condiciones para la concentración y purificación de ADN. En el método del FBI es más recomendable realizar la purificación de los extractos con dispositivos de ultrafiltracción Centricon® YM-100. Mediante este trabajo se demostró que el método de extracción, así como el diámetro de poro de las columnas de purificación y el fundamento de filtración son factores determinantes en el éxito del proceso.

The DNA extraction from bone implies the use of complex methodologies due to problems like the degradation, the amounts DNA obstacles and the presence of inhibiting substances that can Co-be extracted with the DNA. In the Laboratory of Forensic Genetics of the OIJ one has become difficult to the standardization of a useful protocol for extraction and DNA analysis of high quality and amount. With the purpose to find a method that provides the best conditions of DNA purification, extraction and amplification, the comparison of three methodologies of DNA extraction was realised from bony rest, among them the method of demineralization, the used organic method at the moment in the laboratory, coming from the FBI and the commercial Kit Qiagen Blood Maxi Kit. Also one took place the comparison of additional techniques of purification in the protocols of demineralization and FBI. The demineralization showed to be a promising method for the extraction and to DNA amplification of bony rest presented/displayed the best results of quantification; whereas the columns Centricon® YM-50 showed to the best conditions for the concentration and DNA purification. In the method of the FBI he is more recommendable to realize the purification of the extracts with devices of ultrafiltration Centricon® YM100. By means of this work one demonstrated that the extraction methods, as well as the diameter of pore of the purification columns and the foundation of filtration are determining factors in the success of the process.