Estandarización del protocolo de ensayo de unidades formadoras de colonias de células progenitoras hematopoyéticas

Abstract

El trasplante de células madre hematopoyéticas se utiliza actualmente para el tratamiento de ciertas enfermedades hematológicas. Una técnica utilizada para evaluar la capacidad de proliferación in vitro de las células madre hematopoyéticas colectadas en muestras de sangre periférica, sangre periférica movilizada y médula ósea es el cultivo de unidades formadoras de colonias granulocito-eritroides-macrófagos-megacariocitos (UFC-GEMM), unidades formadoras de colonias granulocito-macrófago (UFC-GM), unidades formadoras de brotes eritroides (UFB-E) y unidades formadoras de colonias eritroides (UFC-E) en un medio de metilcelulosa. Esta práctica de especialidad se llevo a cabo en el Laboratorio de Investigación y Enseñanza de Hematología del Hospital San Juan de Dios y el Laboratorio de Ingeniería en Tejidos del Instituto Tecnológico de Costa Rica, con el objetivo de estandarizar los procedimientos de ensayos de unidades formadoras de colonias de células progenitoras hematopoyéticas a partir de muestras de sangre periférica, sangre periférica movilizada y médula ósea. Después de obtener la aprobación del Comité Institucional de Bioética en Investigación de la Caja Costarricense de Seguro Social se estandarizaron los protocolos de obtención, anticoagulación, traslado y descongelación de muestras de médula ósea y sangre periférica; el protocolo de aislamiento de células mononucleadas por gradiente de densidad y el ensayo de unidades formadoras de colonias mediante el cultivo de células mononucleadas en un medio de metilcelulosa. Los ensayos realizados permitieron generar patrones para la identificación de las colonias UFC-E, UFC-GM y UFC-GEMM obtenidas con el medio MethoCult®.

Hematopoietic stem cell transplantation is currently used to treat certain blood diseases. One technique used to assess the in vitro proliferation ability of hematopoietic stem cells collected from peripheral blood, mobilized peripheral blood and bone marrow samples is the culture of granulocyte-erythroid-macrophagemegacariocyte colony forming units (CFU-GEMM), granulocyte-macrophage colony forming units (CFU-GM), erythroid burst forming units (BFU-E) and erythroid colony forming units (CFU-E) in methylcellulose medium. This project was done at the Hematology Teaching and Research Laboratory in Hospital San Juan de Dios and at the Tissue Engineering Laboratory in Technological Institute of Costa Rica. The objective was to standardize the procedures of the Colony Forming Units Assay of hematopoietic progenitor cells from peripheral blood, mobilized peripheral blood and bone marrow samples. After obtaining the approval of the Institutional Bioethics Committee in Research of the Social Security (Caja Costarricense de Seguro Social) were standardized collection, anticoagulation, transportation and samples thawing protocols of bone marrow and peripheral blood, isolation of mononuclear cells by density gradient protocol, and the Colony Forming Units Assay through the cultivation of mononuclear cells in methylcellulose medium. Test patterns made it possible to identify the CFU-E, CFU-GM and CFU-GEMM colonies obtained with MethoCult® medium.