Aplicación de osmolitos como estabilizantes térmicos de soluciones de inmunoglobulina equina

Abstract

El proceso de purificación de proteínas comúnmente implica un detrimento en la estructura y actividad biológica de las mismas, provocado por un número variable de factores, en especial la temperatura. Los anticuerpos presentes en los sueros antiofídicos no están exentos, y en vista de que son responsables de la acción neutralizante del veneno, resulta vital favorecer su estabilidad. En la actualidad se plantean diversas estrategias de estabilización proteica, siendo la más común, sencilla y eficaz, la aplicación de aditivos que modifican favorablemente el entorno de las proteínas. Las diversas observaciones respecto al uso de ciertos osmolitos como estabilizantes, han llevado a la conclusión de que estos compuestos previenen la pérdida de la actividad enzimática, inhiben la agregación irreversible y aumentan la temperatura de transición térmica de diversas macromoléculas. Por tanto, se probaron tres de estos osmolitos: sorbitol, manitol y glicina, en la estabilización térmica de soluciones de inmunoglobulinas producidas por el Instituto Clodomiro Picado, durante el proceso de la pasteurización. A partir de pruebas de análisis como ELISA, cromatografía líquida para proteínas y espectroscopía de infrarrojo, se determinó que el sorbitol favorece la protección de las inmunoglobulinas durante la desnaturalización provocada por las altas temperaturas, a la vez que se plantean como prometedores estabilizantes en el almacenamiento a mediano plazo. No obstante, no se pudo evitar la aparición de turbidez, lo cual a nivel comercial es indeseable y constituye un factor a corregir.

The purification process of proteins is commonly associated with loss of biological activity of these compounds, due to numerous and variable effects, especially temperature. The antibodies contained in snake antivenoms are not an exemption, and because they are responsible for neutralizing the effects of venom, it turns out vital to favor their stability. Currently, there are various protein stabilization strategies, in which case the application of additives that modify the surroundings of the protein is the simplest and more effective alternative. According to the investigations about the implementation of certain osmolytes as stabilizers, these molecules had shown to prevent the loss in enzymatic activity, inhibit the irreversible aggregation and also increase the thermal transition temperature of diverse macromolecules. Therefore, the thermal stabilization effect of three of this osmolytes: sorbitol, mannitol and glycine, was studied during the pasteurization of equine immunoglobulin solutions produced by the Instituto Clodomiro Picado. Based on analysis tests including ELISA, fast protein liquid chromatography and infrared spectroscopy, it was determined that sorbitol favors the protection of immunoglobulins during the denaturalizing process derived of the application of high temperatures. Additionally, it seems like a promising stabilizer during midland long-term storage. Although these positive results, it could not be prevented the apparition of turbidity, and because it is an undesirable feature for a pharmaceutical product, it is an important aspect to correct.